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产品说明/Specification Sheet
产品名称: | 酵母质粒提取试剂盒 | ||||
产品编号: | SK2410-50T | 规格: | 50T | 价格: | ¥398 |
产品类别: | 预混酵母培养基 | CAS#: | N/A | ||
品牌: | coolaber | 级别: | 生物技术 | ||
分子式: | N/A | 分子量: | N/A | ||
危险品: | 危险品系数: | ||||
储存条件: | 2-8℃ | 说明书: |
产品属性:
产品简介
产品说明: 本试剂盒提供了简便有效的方法,只通过3种无毒溶液以及玻璃珠,可快速提取酵母细胞中的质粒。无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂。此方法可以分离酵母基因组DNA以及在E.coli和酿酒酵母中均能复制的穿梭质粒。 自备试剂: 乙醇。 预先在C液中加入无水乙醇15ml,颠倒混匀后置于-20℃或冰上待用; 在D液中加入无水乙醇40ml待用。 操作步骤: 一:裂解 1.用1.5 ml的离心管收集过夜培养好的酵母菌液,12, 000 rpm, 30 sec; 2.吸弃上清,用100uL A液 悬浮酵母菌体,加入0.2 g玻璃珠;涡旋震荡5 min,然后再加入100uL A液,继续涡旋震荡1-2 min; 3.在100 ℃水浴或金属浴上保温3-5 min后迅速置于冰上冷却; 4.以12,000 rpm于4 ℃离心10 min。 二:纯化 1. 吸取100uL的上清液至新离心管中,加入 50uL B液,-20℃放置1h; 2. 以12,000 rpm于4 ℃离心10 min,吸取上清液100uL到新的离心管中; 3. 在上述上清液中加入2倍体积的预冷C液(确定已经加入无水乙醇),迅速颠倒混匀,置于冰上15min,以12,000 rpm于4 ℃离心10 min。 4. 小心吸弃上清,避免触及沉淀;在沉淀中加入1 ml的D液(确定已经加入无水乙醇),以12,000 rpm于4 ℃离心3 min; 5. 吸弃上清液,沉淀在室温干燥后,加入20-50uL的ddH20溶解沉淀; 6. 所得产物可用于PCR,转化大肠杆菌等后续实验。 注意事项: 1.C液和D液加入乙醇易挥发,用后请您及时拧紧盖子。 2.通常酵母质粒拷贝数较低,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计的方法很难检测到。 3.通过此方法提取的酵母质粒1-5 uL可用做PCR反应的模板或者用于转化大肠杆菌。
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