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产品说明/Specification Sheet
产品名称: | 酵母阳性克隆快速检测试剂盒 | ||||
产品编号: | SK2420-200T | 规格: | 200T | 价格: | ¥698 |
产品类别: | 酵母杂交系列 | CAS#: | N/A | ||
品牌: | coolaber | 级别: | 生物技术 | ||
分子式: | N/A | 分子量: | N/A | ||
危险品: | 危险品系数: | ||||
储存条件: | -20℃ | 说明书: |
产品属性:
产品内容:
一)酵母感受态细胞的制备: 1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线,在30℃培养2-4天。 2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。 3.首先把酵母细胞接种到1-2 mL液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。 4.第二天转接到含有10 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。 5.沉淀用10 mL的Y1溶液悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。 6.沉淀中加入0.5-1 mL的Y2溶液悬浮。按50 μL管分装至1.5 mL无菌离心管中。 7. 此时酵母感受态细胞可直接用于转化,操作流程见(二)酵母转化。或者将感受态缓慢冷冻后置于-80℃冰箱保存。为了保证转化效率,感受态不宜直接用液氮冻存,建议用几层纸包好放入泡沫盒中,再将泡沫盒放于-80℃冰箱过夜,后将感受态取出置于-80℃保存。保存一年基本不影响其转化效率。待使用时,从冰箱取出,放置室温溶化后可以直接用于转化,操作流程见(二)酵母转化。
(二)酵母转化: 1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μL的预混液。
2.吸取360 μL的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在预混液中。 3.放置在30 ℃的水浴锅中热激40-60 min,每10 min混匀一次。孵育时间延长可进一步提高转化效率,此步可延长至3个小时。 4.直接吸取上述转化混合液50-150 μL,涂到相应的酵母培养基平板上。 5.30℃培养2-4天。
注意事项: 1. 转化全程要无菌操作。 2. 本公司的YPD Plus(Cat:YT0004)用于转化后复苏酵母菌,可以有效提高转化效率50-100%。 |
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