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产品说明/Specification Sheet
产品名称: | 高效RIPA组织/细胞快速裂解液 | ||||
产品编号: | SL1020-20ml | 规格: | 20ml | 价格: | ¥120 |
产品类别: | 蛋白提取及定量 | CAS#: | N/A | ||
品牌: | coolaber | 级别: | |||
分子式: | N/A | 分子量: | N/A | ||
危险品: | 危险品系数: | ||||
储存条件: | 说明书: |
产品属性:
产品简介: RIPA裂解液 (RIPA Lysis Buffer) 是一种传统的细胞组织快速裂解液,使用RIPA裂解液处理的组织细胞得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。 本公司生产的RIPA裂解液属于中等强度,主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% NP-40,0.5% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂。可以快速有效裂解组织细胞,解离释放细胞全组分蛋白,同时抑制蛋白降解。 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可选用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于RIPA裂解液含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本产品裂解得到样品的蛋白浓度。
使用方法 对于培养细胞样品: 1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。 3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。 对于组织样品: 1. 把组织剪切成细小的碎片。 2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。 3. 按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) 4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项: * 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。购买后可以适当分装后使用。 * 用户需自备PMSF。PMSF(CP8651)可以向本公司订购。 * 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 * 关于裂解液的选择,一方面可以参考我们提供的裂解液成分、特点进行选择,另一方面也需要通 过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。 * 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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