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产品说明/Specification Sheet
产品名称: | Taq DNA聚合酶 | ||||
产品编号: | LB1001-1000U | 规格: | 1000U | 价格: | ¥240 |
产品类别: | 生化试剂 | CAS#: | -- | ||
品牌: | 级别: | ||||
分子式: | 分子量: | ||||
危险品: | 危险品系数: | ||||
储存条件: | 说明书: |
产品属性:
起源
为重组E. coli菌株,其基因组中含有来源于Thermusaquaticus YT1的Taq DNA polymerase基因。
概述
Taq DNA聚合酶是一种热稳定性酶,分子量大约为94kDa。这种酶的天然 形式可在74℃复制DNA,在95℃的半衰期为40分钟。Taq DNA聚合酶在镁 存在的条件下可催化核苷酸沿5’→3’方向发生聚合反应,形成双链DNA;同时它还具有5’ →3’外切酶活性。建议使用 Taq DNA聚合酶进行PCR反应和较高温度条件下的引物延伸反应。 Taq DNA聚合酶无3’→5’端外切酶活性,DNA扩增时没有校正功能。Taq DNA 聚合酶产生的PCR产物为3’端附加一 个“A”,可用于“T-A”克隆。
活性定义
在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为:50mM Tris-HCl (pH 9.0,25℃), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP(含未标记和标记[3H] dTTP ), 10mg活化的小牛胸腺DNA和0.1mg/ml BSA, 终反应体积为50ml。
质量保证
本品经PCR验证,活性测定,内切核酸酶/缺刻酶测定和SDS-PAGE纯度鉴定。保证产品的质量稳定可靠。
使用注意
除了酶活性丧失外,下列因素也可能导致扩增失败:(1) 模板太多或太少 (2)样品中存在Mg2+ 络合剂,导致Mg2+实际浓度过低(3) PCR仪温度不准 (4) 临床来源的样品中含有未知的Taq酶抑制剂 (5) 引物部分降解 (6)dNTP部分降解 (7) Taq酶用量太大等。
用途
常规PCR鉴定 。小片段目标基因克隆(推荐小于500bp) 。标记DNA 3’-末端 。平端PCR产物加“A” 。
主要技术参数
DNA聚合时的延伸速度为每分钟1200个碱基以上,最佳温度65-75℃;dNTP的工作浓度为100-300mM,最佳Mg2+浓度为 1.5-3.0 mM, 最佳pH为8.1- 9.2供应浓度为2.5-5U/ml;-20℃保存至少一年。
酶浓度
5,000 U/ml
贮存溶液
20 mM Tris-HCl, pH 8.0
100 mM KCl
0.1 mM EDTA
5 mM DTT
50% glycerol
0.5% NP40 and 0.5% Tween 20
保存
-20 ℃
10×Taq DNA聚合酶反应缓冲液(含MgCl2):
500 mM KCl,
100 mM Tris-HCl (pH 9.0 at 25℃),
1% Triton X-100 and 15mM MgCl2.
缓冲液适用于使用0.2mM dNTP的反应体系, 贮存于-20℃。 |
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